背景
納米銀具有獨(dú)特的抗菌性能,是世界上最常用的納米材料之一,廣泛應(yīng)用于醫(yī)療設(shè)備、化妝品、紡織品、電子、玩具和家用電器等領(lǐng)域。它們不可避免會(huì)通過廢水排放、大氣沉降等途徑進(jìn)入河口水域,引發(fā)了人們對(duì)其生態(tài)環(huán)境安全性的擔(dān)憂。對(duì)于河口環(huán)境中納米材料的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估而言,微生物(尤其是細(xì)菌)是理想的指示物。因此,準(zhǔn)確測(cè)定納米材料對(duì)細(xì)菌的抑制效應(yīng)是進(jìn)行環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估活動(dòng)的必要前提之一。K-B紙片擴(kuò)散、顯微鏡、平板計(jì)數(shù)、生物量測(cè)定、微量肉湯稀釋、電化學(xué)傳感器、流式細(xì)胞術(shù)、血細(xì)胞計(jì)、表面增強(qiáng)拉曼光譜法、等溫量熱、濁度等方法被用于測(cè)定納米材料在真實(shí)的復(fù)雜介質(zhì)(如河口水)中對(duì)細(xì)菌的影響時(shí),必需繁瑣的分離、純化等前處理步驟,不僅效率低,而且主客觀誤差也在所難免。
方法原理與先進(jìn)性
無論是在單純的LB液體培養(yǎng)基中還是在復(fù)雜的河口水樣品中,電子微生物生長(zhǎng)分析儀均能實(shí)時(shí)展示重復(fù)性良好的V. parahaemolyticus生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)曲線。在各種濃度納米銀下急性暴露過的細(xì)菌均無需分離和純化即可直接上機(jī)測(cè)定存活細(xì)胞的生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)曲線,從而使操作者可以高效、便捷地讀取該納米材料對(duì)V. parahaemolyticus的MIC值。采用電子微生物生長(zhǎng)分析儀法測(cè)定河口水中納米銀對(duì)V. parahaemolyticus的毒理作用,得到的MIC值與采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方法(平板計(jì)數(shù)和微量肉湯稀釋)法所得結(jié)果具有良好的吻合性,但比標(biāo)準(zhǔn)方法節(jié)省1個(gè)步驟,具有操作簡(jiǎn)便、自動(dòng)化程度高、耗時(shí)少、重現(xiàn)性好等顯著特點(diǎn),為高效、準(zhǔn)確測(cè)定納米材料在諸如河口水之類復(fù)雜環(huán)境介質(zhì)中的抑菌效應(yīng)提供了可靠手段。
測(cè)定方法
操作步驟(見下圖):1)V. parahaemolyticus在河口水中暴露于納米銀之后,轉(zhuǎn)移到預(yù)裝有TCBS液體培養(yǎng)基的檢測(cè)管中;2)檢測(cè)管置入電子微生物生長(zhǎng)分析儀中測(cè)定存活細(xì)胞的生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)曲線;3)由細(xì)菌生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)曲線直接讀出示出MIC值。